血液葡萄糖( glucose，Glu)测定在评估机体糖代谢状态、诊断糖代谢紊乱相关疾病，指导临床医师制定并适时调整治疗方案等方面具有重要价值。血液葡萄糖简称血糖，血糖测定包括空腹血糖和随机血糖测定。酶学方法是测定血糖的主要方法，主要包括己糖激酶法、葡萄糖氧化酶法和葡萄糖脱氢酶法。酶学方法特异度和敏感度较高，适用于全自动生化分析仪。

葡萄糖和三磷酸腺苷( ATP)在己糖激酶( HK)的催化作用下发生磷酸化反应，生成葡萄糖-6-磷酸( G-6-P)和二磷酸腺苷( ADP)。G-6-P在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶( G-6-PD)催化下脱氢，氧化生成6-磷酸葡萄糖酸( 6-PG)，同时使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸( NADP ⁺)或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸( NAD ⁺)分别还原成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸( NADPH)或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸( NADH)。反应式如下:

反应式中NADPH或NADH生成的速率与样本中葡萄糖浓度成正比，NADPH或NADH均在波长340nm有吸收峰，可用紫外可见分光光度计监测340nm处吸光度升高速率，计算血葡萄糖浓度。

( 1)酶混合试剂:

反应混合液　pH 7.5

三乙醇胺盐酸缓冲液( pH 7.5) 50mmol/L

MgSO ₄　2mmol/L

ATP　2mmol/L

NADP　2mmol/L

HK　　≥1500U/L

G-6-PD　2500U/L

( 2)葡萄糖标准液　5mmol/L

速率法测定:将预温的混合试剂和样本混合，37℃反应，吸入自动分析仪，比色杯光径1.0cm，在340nm处连续读取吸光度值，监测吸光度升高速率(Δ A/min)。

( 1)终点法测定:按表2-2-1操作。

( 2)表2-2-1中各管充分混匀，在37℃水浴，放置10分钟后，紫外可见分光光度计波长340nm，比色杯光径1.0cm，用蒸馏水调零，分别读取各管吸光度( A _U、 A _C、 A _S和 A _B)。

( 1)速率法:血葡萄糖( mmol/L) =ΔA/min×

( 2)终点法:血葡萄糖( mmol/L) = 葡萄糖标准液浓度

主要活性成分包括: ATP、Mg ^{2 +}、NADP ⁺或NAD ⁺、HK、G-6-PD、缓冲液、防腐剂、葡萄糖定标品等。

参照各分析仪配套的用户指南及具体分析说明。不同实验室具体反应条件会因所使用的仪器和试剂而异，在保证方法可靠的前提下，应按仪器和试剂说明书设定测定条件，进行定标品、质控品和样品分析。

( 1)定标:定标品可溯源至放射性核素稀释质谱法( ID-MS)或美国国家标准与技术研究院( NIST)标准参考物质( SRM) 965。每个实验室应根据工作实际情况建立合适的定标频率。如下情况发生时应进行定标:①试剂批次改变;②质量控制方案要求时或质控值显著变化;③对分析仪进行了重要的维护保养，或更换了关键部件。

( 2)质量控制:每个实验室应当建立合适的室内质控品的检测频率和质控评价规则。每次定标后或每天检验标本时，均应做室内质控品的测定，只有质控品在控，方可检测标本。

( 3)样本上机检测。

全自动分析仪自动计算各样本的葡萄糖浓度。

单位换算公式: mg/dl×0.0555 = mmol/L

己糖激酶法是推荐的葡萄糖测定参考方法。虽然第1步反应非特异性，但第2步有较高的特异性，使总反应的特异性相对高于葡萄糖氧化酶法;试剂成本略高。轻度的溶血、黄疸、脂血症、维生素C、肝素及EDTA等对此方法干扰较小或无干扰。但是严重溶血的样本，由于红细胞中释放出较多的有机磷酸酯和一些酶，可干扰样本中葡萄糖浓度和NAD ( P) H之间的成正比计算关系，从而影响测定结果。在非常罕见的丙种球蛋白血症的病例，特别是IgM型( Waldenstr9m巨球蛋白血症)中，血液葡萄糖的测定结果可能不可靠。

全血葡萄糖浓度比血浆或血清低12%～15%。取血后如全血放置室温，血细胞中的糖酵解会使葡萄糖浓度降低，因此标本采集后应尽快分离血浆或血清;用氟化钠-草酸盐抗凝可抑制糖酵解，稳定全血中的葡萄糖，但有文献报道用氟化钠-草酸盐抗凝的血标本，室温放置在1小时内仍有少量葡萄糖会酵解，之后葡萄糖水平可在至少72小时内保持相对稳定。

β-D-葡萄糖在葡萄糖氧化酶( GOD)的催化作用下氧化生成D-葡萄糖酸，并产生过氧化氢( H ₂O ₂)，在过氧化物酶( POD)的催化作用下，H ₂O ₂氧化色原性氧受体(如联大茴香胺、4-氨基安替比林、联邻甲苯胺等)，生成有色化合物，紫外可见分光光度计505nm处读取吸光度值。反应式如下:

主要成分如下:

( 1) 0.1mol/L磷酸盐缓冲液( pH 7.0)。

( 2)酶试剂: GOD 1200U，POD 1200U，4-氨基安替比林10mg，加上述磷酸盐缓冲液至80ml，调节至pH 7.0，再加磷酸盐缓冲液至100ml，2～8℃保存，可稳定3个月。

( 3)酚溶液:重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中，避光保存，2～8℃保存，可稳定1个月。

( 4)酶酚混合试剂:酶试剂及酚溶液等量混合，避光保存。

( 5) 12mmol/L苯甲酸溶液。

( 6)葡萄糖标准液5mmol/L。

按表2-2-2操作。

混匀，置37℃水浴中，保温15分钟，紫外可见分光光度计波长505nm，比色杯直径1.0cm，以空白管调零，分别读取标准管和测定管的吸光度。

试剂主要活性成分包括: GOD、POD、色原性氧受体或铁氰化物、缓冲液、葡萄糖定标品等。

参照各分析仪器配套的用户指南及具体分析说明。不同实验室具体反应条件会因所使用的仪器和试剂而异，在保证方法可靠的前提下，应按仪器和实际说明书设定测定条件，进行定标品、质控品和样品分析。

( 1)定标:定标品可溯源至放射性核素稀释质谱法( ID-MS)或美国国家标准与技术研究院( NIST)标准参考物质( SRM) 965。如下情况发生时应进行定标:①试剂批次改变;②质量控制方案要求时或质控值显著变化;③对分析仪进行了重要的维护保养，或更换了关键部件。

( 2)质量控制:每个实验室应当建立合适的检测室内质控品的频率和质控评价规则。每次定标后或每天检验标本时，均应做室内质控品的测定，只有质控品在控，方可检测标本。

( 3)标本上机检测。

全自动分析仪自动计算各样本的葡萄糖浓度。

单位换算公式: mg/dl×0.0555 = mmol/L

葡萄糖氧化酶法第1步反应有较高的特异性;第2步反应易受干扰，此方法的特异性低于己糖激酶法。该法仅对β-D-葡萄糖高度特异，而葡萄糖α和β构型各占36%和64%，要使葡萄糖完全反应，必须使α-葡萄糖变旋为β-构型。某些商品试剂中含有葡萄糖变旋酶或通过延长孵育时间，促进α-D-葡萄糖转变为β-D-葡萄糖。

尿素、胆红素、血红蛋白和谷胱甘肽;高浓度的尿酸、维生素C、胆红素、肌酐、L-半胱氨酸、左旋二苯丙胺酸、多巴胺、甲基多巴、柠檬酸等可与色原性受体竞争H ₂O ₂，产生竞争抑制作用，可抑制呈色反应。在非常罕见的丙种球蛋白血症的病例，特别是IgM型( Waldenstr9m巨球蛋白血症)中，血液葡萄糖的测定结果可能不可靠。

β-D-葡萄糖在葡萄糖脱氢酶( GDH)的催化作用下，氧化生成D-葡萄糖酸内酯，同时使NAD ⁺还原成NADH。反应式如下:

可用紫外可见分光光度计监测340nm处吸光度升高速率，计算血葡萄糖浓度。

上述反应中生成的NADH在硫辛酰胺脱氢酶( DLD)的催化下，使噻唑兰( MTT)还原呈蓝色，紫外可见分光光度计490nm处读取吸光度值。反应式如

试剂主要成分如下:

( 1)磷酸盐缓冲液( pH 7.6) : 120mmol/L磷酸盐、150mmol/L氯化钠和1.0g/L叠氮钠，用磷酸或氢氧化钠调节至pH 7.6 ( 25℃)，4℃保存。

( 2)酶混合液: GDH≥4500U/L，变旋酶≥90U/L，NAD 2.2mmol/L，4℃保存，可稳定12周。若试剂吸光度大于0.4 (波长340nm，光径1.0cm，用蒸馏水调零)时，提示酶混合液要重新配制。

( 3)葡萄糖标准液5mmol/L。

按表2-2-3操作。

充分混匀，置20℃室温10分钟或37℃水浴7分钟，紫外可见分光光度计波长340nm，比色杯直径1.0cm，以空白管调零，读取测定管和标准管吸光度。

主要成分包括: GDH、NAD ⁺、MTT、DLD、葡萄糖定标品、缓冲液等。

参照各分析仪器配套的用户指南及具体分析说明。不同实验室具体反应条件会因所使用的仪器和试剂而异，在保证方法可靠的前提下，应按仪器和实际说明书设定测定条件，进行定标品、质控品和样品分析。

( 1)定标:定标品可溯源至放射性核素稀释质谱法( ID-MS)或美国国家标准与技术研究院( NIST)标准参考物质( SRM) 965。每个实验室应根据实际工作情况建立合适的定标频率。如下情况发生时应进行定标:①试剂批次改变时定标;②质量控制方案要求时或质控值显著变化;③对分析仪进行了重要的维护保养，或更换了关键部件。

( 2)质量控制:每个实验室应当建立合适的检测室内质控品的频率和质控评价规则。每次定标后或每天检验标本时，均应做室内质控品的测定，只有质控品在控，方可检测标本。

( 3)样本上机检测。

全自动分析仪自动计算各样本的葡萄糖浓度。

单位换算公式: mg/dl×0.0555 = mmol/L

葡萄糖脱氢酶法对葡萄糖的特异性较高，其测定结果与HK法具有良好的一致性。因反应过程无需氧的参与，因此不受氧分压的影响。一般浓度的抗凝剂或防腐剂，如肝素、EDTA、柠檬酸盐、草酸盐、氟化物、碘乙酸等不干扰测定。一定浓度的胆红素、血红蛋白、维生素C、谷胱甘肽、尿酸、尿素、肌酐等不干扰测定。

成人空腹血浆(清)葡萄糖: 3.9～6.1mmol/L ( 70～110mg/dl)。

血糖升高主要见于:①生理性血糖升高:饭后1～2小时，摄入高糖食物，情绪激动或剧烈运动会导致生理性血糖升高;②糖尿病:空腹血糖≥7.0mmol/L，或口服糖耐量试验中2小时血糖≥11.1mmol/L，或随机血糖≥11.1mmol/L同时有糖尿病症状(其中任何一项有异常均应于另一日重复测定)，三项中有一项超过即可诊断为糖尿病，血糖是糖尿病诊断的重要指标;③内分泌疾病:嗜铬细胞瘤、甲状腺功能亢进症、皮质醇增多症、生长激素释放增多等空腹血糖水平亦升高;④胰腺病变:急性或慢性胰腺炎、胰腺肿瘤、胰腺大部分切除术后等;⑤严重的肝脏病变:肝功能障碍使葡萄糖向肝糖原转化能力下降，餐后血糖升高;⑥应激性高血糖:颅脑损伤、脑卒中、心肌梗死等;⑦药物影响:激素、噻嗪类利尿药、口服避孕药等;⑧其他病理性血糖升高:妊娠呕吐、脱水、缺氧、窒息、麻醉等。

血糖降低主要见于:①生理性低血糖:饥饿及剧烈运动后;②胰岛素分泌过多:如胰岛β细胞增生或肿瘤、胰岛素瘤、口服降糖药等;③升高血糖的激素分泌不足:如胰高血糖素、肾上腺素、生长激素等。