第二节　ABO血型系统

ABO血型系统是人类发现的第一个血型系统，也是临床上最重要的血型系统之一。ABO血型不相容的输血会发生严重的输血反应，甚至导致患者死亡。ABO血型抗原不仅只存在于红细胞表面，而且还广泛存在于消化道、皮肤上皮细胞、呼吸道、泌尿系统以及人的体液中，包括唾液、眼泪、尿液、消化液、胆汁、乳液、羊水、体腔液及卵巢囊肿液中。

一、ABO血型抗原与抗体的特性

ABO血型系统是卡尔·兰德斯坦那(Karl Landsteiner)在1900年发现的。基于他所假设的两种红细胞抗原A和B，兰德斯坦那发现，根据每个人红细胞上是否存在A和B抗原，可将人分成四种血型。同时，兰德斯坦那又发现若一个个体的红细胞上缺乏A抗原，则其血清中通常会有抗A抗体。若一个个体的红细胞上缺乏B抗原，则其血清中通常会有抗B抗体。

ABO血型分类原则如下：红细胞上有A抗原、血清中有抗B者称为A型；红细胞上有B抗原、血清中有抗A者称为B型；红细胞上有A和B抗原、血清中无抗A和抗B者称为AB型；红细胞上无A和B抗原、血清中有抗A和抗B者称为O型。

二、ABO血型表现的频率

由于鉴定ABO血型比较容易，在世界范围内已积累了不下几十万中国人ABO血型的资料。表2-3是中国各地区ABO血型的分布。从表2-4可见A、B、O血型在中国分布特点为：从北向西南的方向，B基因频率逐渐下降而O基因频率升高；云南、贵州、四川和长江中下游地区，A基因频率升高，广东、广西、福建、台湾O基因频率较其他地区高。

三、ABO血型的遗传与生化合成

ABO血型遗传是常染色体显性遗传。根据遗传学原理，每个子代均可从亲代各得到一个单倍体，因此根据父母的血型可以推断子女的血型(表2-5)。

现在很少用ABO血型进行亲子关系鉴定，当用ABO血型判定遗传关系时，应注意特殊情况，例如极罕见的顺式AB型。需要对家族血型进行分析及应用分子生物学技术，才能得出正确结论。

ABO血型抗原的化学结构属于糖蛋白，它们的构成主要涉及两个分离座位的基因； H座位基因和ABO座位的基因，这些基因不直接产生抗原，而是产生糖基转移酶，糖基转移酶决定了ABO血型抗原的特异性。因此糖基转移酶是基因的直接产物，而血型抗原决定簇的单糖或寡糖是基因的间接产物，目前已了解大约有100个糖基转移酶涉及ABO血型抗原及它们的变异型的构成。

ABO血型的抗原决定簇是连接在血型物质的多聚糖前体或称为载体链上。血型物质的前体是多糖结构，人类已发现了5个型的血型多聚糖前体，在构成血型抗原的结构上，以Ⅱ型链为主，Ⅲ或Ⅳ型链只少量存在，Ⅴ型链罕见，Ⅰ型链不属于细胞内源性物质而是由血浆吸附而来。血型多聚糖前体的基本结构是最后三个糖，分别是半乳糖-乙酰葡萄糖胺-半乳糖。

ABO血型的抗原决定簇是低聚糖链的结构，它们的产生是由一个连续的两个步骤组成。第一步是由一位于第19号染色体上的H基因控制，H基因负责编码岩藻糖转移酶，这个酶能识别血型多聚糖前体的终端半乳糖，并将岩藻糖添加到半乳糖上，形成了特异性的H抗原。H抗原在O细胞上表达重组为A、B抗原的前体。第二步是由位于第9号染色体的ABO基因座位控制。负责编码A或B等转移酶，完成A和B抗原的构建。A抗原是通过ABO基因座位上的A基因，编码N-乙酰半乳糖胺糖基转移酶(简称A酶，下同)，A酶把H抗原作为底物，催化反应，将N-乙酰半乳糖胺(N-acetylgalactosamine，GalNAC)加接到终端的半乳糖上，构成A抗原。A酶只能在H抗原存在的情况下表现其催化活性。

B抗原是通过ABO基因座位中的B基因，编码半乳糖糖基转移酶(简称B酶，下同)催化反应，将终端半乳糖以α(1→3)的方式，加接到H抗原的终端半乳糖上，构建成为B抗原。同样B酶也只能在H抗原的存在下，表现其酶的活性。

四、ABO亚型

ABO血型有数种亚型，A和B亚型红细胞与A和B型红细胞主要区别不仅表现在细胞膜上抗原决定簇数量上，也表现在抗原性质上，这些细胞与标准抗A、抗B血清反应较弱，有时肉眼几乎看不到凝集。在鉴定亚型时，除用抗A、抗B血清之外，还没有发现相应的特异性血清。因此，实际上是根据受检者红细胞抗原的强弱、血清中抗体的性质及唾液中分泌型物质的性质及多少来确定亚型的。

A亚型有A1、A2、A3、Ax、Aint、Abantu、Ael、Am、Ay、A(B)等。特点：与抗-A血清凝集弱、混合外观，甚至不凝集。

A1亚型：红细胞膜上含有A抗原和A、抗原，血清中只含抗-B抗体，A1亚型和A1B亚型约占A亚型的80%。

A2亚型：只含有A抗原，血清中除了含抗-B抗体外，还含有抗-A、抗体，有1%～8%A2亚型血清中含有抗-A、抗体，能够凝集A1型及A1B型红细胞。A2亚型和A2B亚型约占全体A亚型的20%。A1亚型红细胞凝集力＞A2亚型红细胞凝集力。

A3亚型：A3红细胞与抗-A和抗-AB血清反应呈典型的混合视野凝集现象。

Ax亚型：Ax红细胞不与抗-A反应，只与O型人抗-A1B反应，Ax可以和一些单克隆抗体反应。

Ael亚型：Ael红细胞不与抗-A和抗-AB反应，用吸收放散试验能证实其红细胞上有A抗原。

Aint亚型：Aint与抗-A1反应比A1较弱，与H反应强度较强。

总之，除A1及A2亚型外，其余的A亚型与高效价抗-A或O型血清只能发生在显微镜下可见的微弱凝集，甚至不凝集，需用吸收放散试验检测红细胞表面的A抗原，或用吸收抑制试验证明唾液中A型物质存在才能鉴别。

B亚型有B2、Bx、Bm、Bel、B5、B(A)等。特点：与抗-B血清凝集弱，混合外观，甚至不凝集。

AB亚型：由于有A和B亚型存在，故有AB亚型存在。AB亚型中有些有不规则抗体，22%～35%的A2B亚型血清中含有抗-A1抗体，它能凝集A1型及A1B型的红细胞。

O亚型(Oh型)：在孟买人中发现有一种红细胞膜上没有H抗原的O型(又叫孟买血型)，其红细胞不被抗-A及抗-B和抗-H血清凝集，其血清中含有抗-A及抗-B和强烈的抗-H抗体，该型的血清能凝集所有O型的红细胞，此型患者只能输O亚型同型血。

1．A1、A2亚型鉴定

利用抗A1血清与A1型红细胞发生凝集，而不与A2型红细胞凝集的特性，可区分为A1型与A2型。

(1)材料

① 抗A1标准血清。

② 受检者2%红细胞悬液。

③ 标准A1和A2型2%红细胞悬液，作对照用。

(2)操作

① 取玻片1张，两端标记A1和A2。

② 两端均加抗A1血清各1滴。

③ A1端加2%A1红细胞悬液1滴。

④ A2端加2%A2红细胞悬液1滴。

⑤ 另取1张玻片，加抗A1血清1滴，再加2%受检者红细胞悬液1滴。

⑥ 用玻棒或牙签将上述滴加物混匀，室温下10min观察结果。

(3)结果判断　如A1型对照红细胞凝集，A2型对照红细胞不凝集，受检者红细胞凝集，判为A1亚型，受检者红细胞不凝集，则为A2亚型。

新生儿ABO抗原较弱，不宜做亚型鉴定。

2．A3、A4、Am、Ax、A3B、A4B、B3、Am、Bx等亚型鉴定

对于这类亚型的鉴定，除了做常规ABO血型鉴定外，还要测定其唾液中血型物质和应用吸收放散试验等方法综合鉴定A、B亚型(表2-6)。

五、对ABO血型不一致的解决办法

血型鉴定结果不一致的原因有两类：一类为技术方面的原因，是最主要的原因；另一类是责任方面的原因。

1．技术方面的原因

可以出现假阴性及假阳性结果。

(1)假阴性结果　应发生凝集现象而未出现者。

① 标准血清效价太弱，为标准血清运输及保存不当可能所致。

解决办法：在运输、使用过程中，盛放试剂的容器内的温度要保持在2～8℃，在保存期内注意定期测定标准血清效价；不使用超过保存期的标准血清，坚持正向、反向定型。

② 红细胞悬液过浓或过淡，使抗原抗体比例失调而反应不明显。

解决办法：IgM抗体选用2%红细胞悬液，IgG抗体使用5%红细胞悬液。

③ 标准血清与红细胞悬液比例不当，使反应不明显。

解决办法：采用1∶1的比例，严格按照各试剂说明书的要求做。

④ 被检红细胞敏感性过低，多见于新生儿、老年人或某些疾病致红细胞抗原减弱者，或放置太久。

解决办法：所用标本不超过3d，做正向、反向定型。

⑤ 反应时间不足，未按规定时间判断结果，并报告，多见于玻片法。

解决办法：应在10～30min后报告结果。

⑥ 温度不适，如温度过高血细胞受损可产生假阴性。

解决办法：实验室温度要保持在20℃左右。

⑦ 红细胞凝集较细小，观察不细心，误认为未凝集。

解决办法：应坚持用显微镜观察。

⑧ 补体存在而溶血。

解决办法：实验前后对照观察，发现溶血，灭活补体再做。

⑨ IgG抗体遮断致未凝集。

解决办法：应做释放试验后再做。

(2)假阳性反应

① 红细胞钱串状凝集：红细胞相连成串，而非真正的凝集。常见于血清浓缩，血纤维蛋白原或球蛋白增高，实验时间过长，温度过低或输入大量高分子物质。

解决方法：使用合格血清，将受检者红细胞用0.9%氯化钠注射液洗涤3次，再滴加1～3滴生理盐水，混匀，钱串状凝集即可散开。

② 寒冷凝集：见于正常人血清中含有寒冷凝集素，且效价过强，未被充分吸收所致。

解决办法：用37～45℃的生理盐水洗红细胞，并在37℃水浴箱内进行实验。多见于病毒性肺炎、溶血性贫血、阵发性冷性血红蛋白尿症及肝硬化等。

③ T凝集：患者感染或细菌污染红细胞能与任何人的血清发生凝集，此种红细胞也称全凝集红细胞。

解决办法：用AB型血清与患者红细胞做凝集试验，证实有凝集；用标准红细胞检测血清抗体，用患者的红细胞做吸收释放试验，或取唾液做吸收抑制试验。

④ H凝集：因细菌污染血清而产生的H抗体，与红细胞的H抗原反应产生凝集。

解决办法：试验所用血清避免细菌污染，定期检测血清的特异性。

⑤ 继发血液凝固：可发生于未经洗涤的红细胞悬液和新鲜血清。

解决办法：将实验用的红细胞洗涤，应用符合要求的标准血清。

⑥ 玻片法所致：反应时间过长，检验者责任心不强，观察结果不及时，放置时间过久，血清浓缩，细胞聚集均可造成假阳性。

解决办法：加强责任心，严格操作规程。

⑦ 其他：脐带华通胶、自身免疫抗体、药物性抗体(青霉素、磺胺类等)等均可出现假凝集现象，试验当中应引起重视。

2．责任方面的原因

① 标本采错，张冠李戴。

② 大批量鉴定时，标签贴错，编号编错。

③ 少量标本，仅凭记忆，不做标记。

④ 所有试剂前后滴加次序搞乱或漏加、重加。

⑤ 使用不合格试剂。

⑥ 未认真观察结果，填错报告。

以上几项有一项做不到位，均可出现错误结果。输血前的血型鉴定是事关安全输血的首要检查。为此，检验人员必须树立全心全意为患者服务的思想；以高度的责任心、严谨的工作态度，做好各项工作，严格执行各项操作规程；在任何情况下，都要细心谨慎，思想高度集中，要养成忙而不乱的工作习惯，以科学的工作作风完成每个实验步骤，为患者安全输血打下牢固的基础。